KAPA EvoPrep Kit

特長

KAPA EvoPrep キットは、長年培われてきたHyperPrepの技術と次世代シーケンスのノウハウを基に新しく改良されたライブラリー調製キットです。
新たに改良された「KAPA EvoT4 DNA リガーゼ」が導入され、セルフリーDNAやFFPE DNAのような難しいとされているサンプルからでもライブラリー調製が可能となりました。

困難なサンプルにも対応

• cfDNAやFFPEのような難しいサンプルでもクオリティーの良いデータを得ることが可能
• 幅広いDNAインプット（0.1 ng～500 ng）で微量サンプルからでもライブラリー調製が可能　(PCRフリーの場合、50 ng～)
  
  

操作が簡単になり、作業時間が短縮

• Ready Mixタイプで操作が簡単
• 自動化にも対応したプレートタイプのラインナップも導入
• 操作が簡単になる事で、ヒューマンエラーのリスクを低減
• Ligationの時間がわずか5分で、トータル所要時間が短縮
  
  

ライブラリー収量の向上と優れたシーケンス品質

• KAPA EvoT4 DNA リガーゼにより、ライブラリーの変換効率が向上
• 高感度で確実なバリアント検出が可能
• シーケンシングアーティファクトを最小限に抑えたユニーク性の高いライブラリー調製が可能
• ターゲットエンリッチメントのワークフローでも優れたパフォーマンスを実現
  
  

シンプルなワークフロー

① End Repair&A-tailingとAdapter Ligationの試薬がReady Mixタイプになり、酵素とBufferの混合が不要
② Ligation Ready Mixには新しいKAPA EvoT4 DNA リガーゼが採用され、ライブラリー収量が向上
➂ 自動化に対応したプレートタイプの試薬のラインナップも追加

図1：KAPA HyperPrep Kit (左)とKAPA EvoPrep Kit (右)のワークフロー比較

FFPE検体のワークフロー

FFPEサンプルの場合、下記のワークフローを推奨いたします。
※詳細プロトコールは「KAPA HyperPETE Somatic Tissue DNA Evolved Workflow」と「KAPA EvoPrep Kit」 の取説をご参照ください。

FFPEサンプルからのLPの場合、以下の３製品を組み合わせてご使用いただきます。

1 KAPA NGS DNA Extraction Kit
　FFPETカール、またはFFPET組織切片の場合、このキットを用いてDNA抽出をして下さい。
3 KAPA NGS FFPE DNA QC Kit
　FFPEサンプルのDNA分解度をqPCRで評価するキットです。
4 KAPA NGS FFPE DNA Polishing Kit
　1,000xのようなデプスを多く必要とする低頻度変異解析を行う場合には、このキットを使用することを強くお薦めします。

ライブラリー収量がUP

• 様々なインプットDNA量で高いライブラリー変換効率を実現
• ダウンストリーム処理における増幅サイクルが少なくてすむので、重複率が低く、シーケンスカバレッジが高い
• KAPA Unique Dual-Indexed Adapter Kitを使用すればPCRフリーでの調製も可能　(最小インプット量：50ng～)
  
  

図2：KAPA HyperPrep Kit (左)とKAPA EvoPrep Kit (右)のライブラリー収量比較

KAPA EvoPrep Kitを用いて作製したライブラリーは、すべてのインプット量でKAPA HyperPrep Kitよりも高い収量が得られた。

難しいサンプルでもライブラリー調製が可能

• FFPEやcfDNAのような困難なサンプルタイプから、ユニークライブラリーの調製が可能
• cfDNAからでもユニーク分子が多く、データの信頼性が向上
  
  

図3：各社ライブラリー調製キットの違いによるシーケンスデータ比較

サンプル：健常ヒト血漿由来cfDNA
インプット量：1 ng（取説推奨条件：10 ng ～）
アプリケーション：WGS
使用した装置：NovaSeq6000、2x150bp
解析に使用されたデータ量：400Mクラスター（800Mリード）

機械的に断片化されたDNAによる高いライブラリー回収率

シーケンスアーティファクトの減少

• シーケンスカバレッジの偏りを最小限に抑え、より均一なシーケンスカバレッジとシーケンスコストの削減を実現 
• シーケンスメトリクスの改善により、シーケンスのアーティファクトが減少し、データの信頼性が向上
  
  

図4：シーケンス性能

サンプル：Human gDNA (NA12878)、コバリスでの断片化
インプット量：100 ng (PCRフリー)
使用した装置：NovaSeq6000、2x150bp
解析に使用されたデータ量：180Mクラスター（360Mリード）

Targert Capture法でのパフォーマンスとシーケンス結果

• 高い特異性と1000x以上の高いターゲットカバレッジを両立
• 高い均一性により、ディープシーケンスアプリケーションにおけるシーケンス効率を向上
  
  

図5：ターゲットキャプチャー法を用いたシーケンスデータ

サンプル：cfDNA 
インプット量：10 ng 
使用したパネル：KAPA HyperCap Oncology Panel (241 Kb)
使用した装置：NovaSeq6000、2x150bp
解析に使用されたデータ量：50Mクラスター（100Mリード）

標準ワークフローで使用可能なアダプター試薬

• KAPA Unique Dual-Indexed Adapter Kit
• KAPA Universal Adapter / KAPA UDI Primer Mixes
• KAPA Universal UMI Adapter / KAPA UDI Primer Mixes
  
  

仕様

論文情報

関連製品

• KAPA HiFi HotStart ReadyMix