Q

持ち込めるテンプレート量が250 ngまでと記載されていたかと思います。 (もう一度読んでみようと思ったのですが、どこに記載されていたか見つかりません。すみません。) そこで質問なのですが、これはgDNAを想定した量でしょうか。 私どもではcDNAをリアルタイムPCRで定量しています。200 bpくらいの長さなのですが、持ち込み量を、もう少し増やしても大丈夫でしょうか。

ABI7900HTで、TaqManプローブなどの蛍光プローブを用いて、cDNAを定量されるのでしたら、本キットをご使用いただけるかと存じます。 おっしゃるとおり、本キットのプロトコールの反応組成の表中に「Template DNA <250 ng」との記載がございます。これはgDNAでも、cDNAでも、同様となります。 また、「200bpくらいの長さなので、持ち込み量を増やしても大丈夫か?」というご質問の意味としましては、 「200bpは少し長めで増幅し難いため、確実に検出するために持ち込み量を増やしたい」ということでしょうか? もしもこの場合、200bpでしたら特に問題なく増幅は可能ですので、持ち込み量は気にされなくても大丈夫ではないかと存じます。 なお、通常はテンプレート持ち込み量は250ngで十分なのですが、持ち込むcDNA中にターゲットとする配列が極僅かと予想される(発現量が少ない)場合、cDNA持ち込み量をもう少し増やすことは可能かと思います。
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