ハイファイDNAポリメラーゼ

(KAPAHiFi DNA Polymerase)

KAPA BIOSYSTEMS

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製品概要

◆1億種類以上の独自変異株から選抜された全く新しいエンジニア酵素
◆増幅性と正確性を両立した新酵素採用 (融合タンパクではありません)
◆高い正確性と卓越した伸張性 (30秒/Kb)
◆増幅困難なテンプレートにも対応 (GCリッチ専用バッファー付属)

KAPA HiFi DNA Polymerase / HiFi HotStart の特長

●Ultraハイフィデリティーでありながら、HiFi最速レベルの伸張性

参考文献

1)
Angel M, Yanik MF (2010) Innate Immune Suppression Enables Frequent Transfection with RNA Encoding Reprogramming Proteins. PLoS ONE 5(7): e11756. doi:10.1371/journal.pone.0011756
先天的免疫抑制が再プログラミングタンパクをコードするRNAによる高頻度トランスフェクションを可能にする。

2)
Minakshi Guha et al., Differential strand separation at critical temperature:A minimally disruptive enrichment method for low-abundance unknown DNA mutation, Nucleic Acids Research, 2012, 1–9 doi:10.1093/nar/gks1250 (2012)
DSSCT(Differential strand separation at critical temperature)法:低含量の未知のDNA変異解析に向けた最低限に影響を抑えたエンリッチ手法

<リンク先>*以下のリンク先よりpdfを無償でご覧いただけます。
Differential strand separation at critical temperature:A minimally disruptive enrichment method for low-abundance unknown DNA mutations

3)
Naomi Park* et al,
An improved approach to mate-paired library preparation for Illumina sequencing,
Methods in Next Generation Sequencing. Volume 1, Pages 10–20, ISSN (Online) 2084-7173, DOI: 10.2478/mngs-2013-0001, July 2013

*Wellcome Trust Sanger Institute, Hinxton, UK.
「Illumina社次世代シーケンシングにおけるメイトペア・ライブラリー調製法の改良」

<リンク先>
この論文のリンク先はこちらになります。このページから直接ダウンロードできます。

KAPA HiFi HotStart ReadyMix の特長  

GC/ATリッチPCRに!!
●便利な2xマスターミックスで、簡単・迅速にPCRが可能
独自の酵素安定化剤により、凍結融解の影響をほとんど受けません。
●ホットスタート機能つき

参考文献

1)

英国 Wellcome Trust Sanger研究所において、KAPA HiFi DNA polymerase(KAPALibararyAmplificationKit)によるNGSライブラリーのバイアス低減の有用性が検証されました。

(1)
Samuel O Oyola* et al., Optimizing Illumina Next-Generation Sequencing library preparation for extremely AT-biased genomes, BMC Genomics 13:1, (2012)
 *Wellcome Trust Sanger Institute, Hinxton, UK.
「Illumina社次世代シーケンシングにおけるATリッチなライブラリー調製の最適化」
(右 【関連情報】 の参考文献よりダウンロード可能です。)

(2)
Michael A Quail* et al., Optimal enzymes for amplifying sequencing libraries, Nature Methods 9, 10–11 (2012)
*Wellcome Trust Sanger Institute, Hinxton, UK.
「次世代シーケンスにおけるライブラリー増幅に最適な酵素」

2)
Samuel Kvarnbrink et al, The biological importance of LRIG1 in lung cancer, 2012-06-04, Umeå University, Sweden
「肺がんにおけるLRIG1の生物学的重要性」
(右 【関連情報】 の参考文献よりダウンロード可能です。)

(1)
Samuel O Oyola* et al., Optimizing Illumina Next-Generation Sequencing library preparation for extremely AT-biased genomes, BMC Genomics 13:1, (2012)
 *Wellcome Trust Sanger Institute, Hinxton, UK.
「Illumina社次世代シーケンシングにおけるATリッチなライブラリー調製の最適化」
(右 【関連情報】 の参考文献よりダウンロード可能です。)
(2)
Michael A Quail* et al., Optimal enzymes for amplifying sequencing libraries, Nature Methods 9, 10–11 (2012)
*Wellcome Trust Sanger Institute, Hinxton, UK.
「次世代シーケンスにおけるライブラリー増幅に最適な酵素」
【参考文献?】
Samuel Kvarnbrink et al, The biological importance of LRIG1 in lung cancer, 2012-06-04, Umeå University, Sweden
「肺がんにおけるLRIG1の生物学的重要性」
(右 【関連情報】 の参考文献よりダウンロード可能です。

仕様

◆伸長スピード(目安)
15sec / kb(1kb以下)、30-60sec / kb(1kb以上)

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CatNo.概要単位価格在庫
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KK2501 KAPA HiFi HotStart DNA Polymerase(dNTPsミックス付き) 100units 在庫わずか
KK2502 KAPA HiFi HotStart DNA Polymerase(dNTPsミックス付き) 250units 在庫あり

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アプリケーションノート

取扱説明書

FAQ

使用方法・
技術的内容
KAPA Library Amplification Kitについて教えてください。これまでilluminaの純正オリゴを使ってきたのですが、今回からNebnext Singleplex Oligos for Illuminaを使うことになりました。KAPA LAキットはgenomic DNA用のプロトコルを使用しています。Nebnext Singleplex Oligos for Illuminaを使用した際、反応液の組成やPCRプログラムをどのようにさせてもらえば良いのか教えてください。
基本的にはこれまでの純正オリゴアダプターで実施されていらっしゃった場合と同じ反応組成およびプログラムで問題ないかと存じます。

(詳細)
Nebnext Singleplex Oligos for Illuminaのキット内容を確認しましたところ、ループ状のアダプターと、ループを切断する酵素、増幅用プライマーのセットになっておりました。
したがいまして、アダプターをライブラリーにライゲーションしてループを切断してしまえば、基本的には純正と近い形状のライブラリーになるかと存じます。

その後のステップについては特に注意点等の記載がありませんでしたので、純正の場合と同じステップで
進めて良いかと存じます。

以上のように、KapaLAKitに関しては、その後の増幅ステップで使用いたしますので、
増幅用のプライマーをNebnext Singleplex Oligos for Illuminaのプライマーに単純に置き換えていただければ、基本的には同じようにご使用いただけるかと存じます。
製品仕様 このマスターミックスに含まれているMgとdNTPの終濃度を教えて下さい。 dNTPは各々どれくらいで4種類まとめてどれくらいかという風に教えていただけますか?
KapaHiFi HotStart ReadyMix(マスターミックス)のMgとdNTPsの終濃度は以下のとおりとなります。

  (1x)最終濃度
  2.5 mM MgCl2
  1.2 mM dNTPs (各0.3 mM)

下記の取扱説明書の2ページ左側にも記載がございますので、ご確認ください。
http://www.kapabiosystems.com/public/pdfs/kapa-hifi-pcr-kits/KAPA_HiFi_HotStart_ReadyMix_TDS.pdf
製品仕様 KAPA HiFi HotStart ReadyMix PCR Kitsは国内で対象になるような法令は あるでしょうか(消防法の危険物に該当など)?
あらためましてMSDSにて確認いたしましたが、本製品には国内法規に
抵触するような成分は含まれておりませんでした。

念のために、製品詳細ページ“MSDS”タブにございます、MSDSをご確認いただけますようお願い申し上げます。

なお、厳密に申し上げますと、実際にはGlycerolは消防法で対象となる成分ですが、
容量が少ないために(指定数量未満のため)、規制を受けることはございません。

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レビュー

5 1件のレビュー

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5.0

2018年05月14日

操作も簡単で、きちんと増え、使いやすかったです。

私たちは県立高校の生物クラブに所属しています。部活動の一環でKAPA HiFi HotStart ReadyMixを使用させて頂きました。使用する生徒は分子生物学的な実験など全くしたことがない高校生ですが簡単に調整できる試薬だったので、失敗もなく、時間もかかることなく手軽に実験できました。

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