Q
制限酵素には、Hind IIIとBam HIのように、FastCut Bufferを1Xで使うものと2Xで使うものがあるようです。 FastCut Buffer推奨濃度の異なる酵素を使用したDouble Digestionは、どのように進めればよいでしょうか?
2種類の酵素で、FastCut Buffer推奨濃度が異なる場合には、2段階で反応を進めることを推奨しております。
以下に、Hind IIIとBam HIで行う際の反応プロトコルを記載いたします。
こちらをご参照にご実施ください。
1) 1st digestion
DNA 1 µg (~10 µL)
10X FastCut buffer 5 µL
Hind III (20 unit/µL) 1 µL
Sterile water up to 50 µL
→ Incubate at 37℃ for 15 min
→ Incubate at 65℃ for 20 min (heat inactivation)
2) 2nd digestion
1st reaction mixture 50 µL
*10X FastCut buffer 7 µL
Bam HI (20 unit/µL) 1 µL
Sterile water up to 60 µL
→ Incubate at 37℃ for 15min
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